黄瓜白粉病拮抗细菌的筛选鉴定及其生防效果

摘要 摘要：为发掘对黄瓜白粉病有较好防治效果的生防菌株，对黄瓜白粉病根际土壤细菌进行分离纯化，采用盆栽活体生测方法对白粉病拮抗细菌进行筛选，发现 1株对黄瓜白粉病生防效果

　　摘要：为发掘对黄瓜白粉病有较好防治效果的生防菌株，对黄瓜白粉病根际土壤细菌进行分离纯化，采用盆栽活体生测方法对白粉病拮抗细菌进行筛选，发现 1株对黄瓜白粉病生防效果较好的细菌 SDNY-038。经过菌株鉴定以及进一步的生测验证表明，该菌株属于芽孢杆菌属(Bacillussp.)细菌，对黄瓜白粉病具有一定的防治效果，7、14d后生防效果分别达到 78.00%、84.67%，与阳性对照药剂相比，防效施高 55.93、66.37百分点，该菌株具有进一步开发成为生物农药的潜质。

　　关键词：黄瓜白粉病;拮抗;生防菌;鉴定;生物防治

　　1 材料与方法

　　1.1 试验材料

　　1.1.1 供试菌株 芽孢杆菌菌株 SDNY-038，由山东省农药科学研究院生化实验室分离纯化并保存。供试黄瓜品种为宝杨 5号，为易感病品种，购自上海种子市场。

　　1.1.2 培养基 菌种分离筛选和活化培养基：3g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，15g琼脂，1000mL自来水，pH值为7.2～7.4。种子菌液制备和菌种发酵基础培养基：3g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL自来水，pH值为 7.2～7.4。

　　1.1.3 对照药剂 100亿 CFU/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂，购自美国拜沃股份有限公司。

　　1.1.4 试验仪器 主要仪器有摇床、培养箱、洁净工作台、高压灭菌锅，均购自上海博讯实业有限公司医疗设备厂。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 拮抗细菌的分离纯化 采用梯度稀释平板涂布法分离黄瓜白粉病根际土壤中的细菌[12]，根据平板上菌落形态、颜色等挑取单菌落进行纯培养。

　　1.2.2 种子菌液的制备 将分离保存的菌种转接到牛肉膏蛋白胨培养基平板上，在 28℃温度条件下培养 48h进行活化，活化后挑取部分菌落接于装液量为 100mL的 250mL锥形瓶的种子菌液制备培养基中，30℃，180r/min振荡培养48h即为种子菌液。

　　1.2.3 发酵液的制备 将发酵好的种子液按 5%(体积比)的比例接种到装有 200mL菌种发酵基础培养基的 500mL锥形瓶中，30℃，180r/min振荡培养 72h备用。

　　1.3 数据分析采用 Excel软件进行数据分析以及差异性分析。

　　2 结果与分析

　　2.1 拮抗细菌的分离筛选采用活体生测方法对土壤中分离得到的细菌进行筛选，对黄瓜白粉病致病菌有防效的菌株相对较少，拮抗能力较强的菌株只占 2.5%左右，有较弱拮抗作用的菌株占 5%，其他均无防 效。选 取 拮 抗 能 力 较 强 的 1株 拮 抗 细 菌 编 号 为SDNY-038，经过多次复筛，均表现出较好的生防效果，提前2h喷洒和提前 24h喷洒与清水对照相比均具有显著性差异，提前 2h喷洒在 7、14d后的防治效果分别为 87.45%、87.35%，提前 24h喷洒在 7、14d后的防治效果分别为57.84%、41.70%，提前 2h喷洒比提前 24h喷洒在 7、14d后分别提高 29.61、45.65百分点(图 1)。

　　2.2 生防菌株 SDNY-038对黄瓜白粉病盆栽防治效果盆栽测定结果显示，对生防菌株 SDNY-038在施药 7d后的喷施效果进行调查，生防菌株 SDNY-038的病情指数和防治效果分别为 3.31、78.00%，防治效果比阳性对照药剂高出 59.93百分点，14d后的病情指数和防治效果分别为12.11、84.67%，防治效果比阳性对照药剂高出 66.37百分点，病情指数与防治效果与空白对照相比均呈显著性差异(图 2)。

　　2.3 生防菌株 SDNY-038的形态特征以及生理生化鉴定结果生防菌株 SDNY-038在基础培养基上生长迅速，菌落呈圆形，乳白色，不透明，无皱褶，边缘不规则，菌落表面光滑，湿润，经革兰氏染色鉴定为革兰氏阳性菌，能水解淀粉和还原硝酸盐，葡萄糖、木糖、甘露糖以及柠檬酸盐生长试验反应均为阳性。

　　3 讨论与结论

　　近几年，随着国家对环境安全越来越重视，化学农药新品种的登记以及产品生产的门槛越来越高，生物农药的研制成为大势所趋，发掘高效低毒的生物农药并不容易，尽管过去几年人们开发的生物农药数不胜数，但真正有较好防治效果的产品是少之又少。对黄瓜白粉病具有防效的生防菌在国内外有不少的报道[16-18]，说明生防菌用于黄瓜白粉病的防治具有较大的发掘潜力。

　　通过对黄瓜白粉病根际土壤菌进行分离纯化，以及活体黄瓜白粉生测试验筛选，发现 1株对白粉病具有较好防治效果的生防细菌，通过对该菌株 16SrDNA进行鉴定，结合相关的生理生化特征，发现其与芽孢杆菌属于同一属，具有较好的预防保护效果，在对幼苗处理 7、14d后的防效分别达到7800%、84.67%，持效期较长，具有较好的应用开发前景。

　　参考文献：

　　[1]冯东昕，李宝栋.主要瓜类作物抗白粉病育种研究进展[J].中国蔬菜，1996(1)：55-59.

　　[2]范瑛阁，龚明福，朱丽霞.黄瓜白粉病菌生防菌筛选及生防机制初步研究[J].北方园艺，2010(14)：150-153.

　　《黄瓜白粉病拮抗细菌的筛选鉴定及其生防效果》来源：《江苏农业科学》，作者：王海利，张晓慷，王滢秀，韩金涛，张新刚。

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